核酸蛋白检测仪、紫外检测仪是液湘色谱仪中的一种紫外检测装置,该仪器配有层析柱、恒流泵、部分收集器等,即组成一套完整的液色湘色谱分离分析系统。它可应用于现代生物学研究,药物测定、农业科研、化工、食品及医疗单位对具有紫外吸收的样品作定量分析。本仪器主要元器件均采用进口,仪器全部采用LED数字显示,使用方便。
工作原理
从光源发出的光经狭缝,滤色器聚焦到样品池上,此单色光通过样品池射到光电倍增管的光阴面上,使光束由于样品浓度不同所引起透光强度的变化转换成光电流变化,此光电流经放大器放大,并输入到对数转换器、使透光率T转换成光吸收A输出即A=lgT/1=ε·CL式中ε为待测样品的摩尔消光系数,C为样品浓度,采用摩尔/升单位,L为光程,用厘米作单位。根据上式只要测出了A、L和ε就可求出样品浓度C。若从放大器直接输入到记录仪,则在记录仪上绘出的是样品透光率T变化的图谱,若从对数转换器输入到记录仪上,在记录仪上绘出的是样品光吸收变化的图谱。
使用说明和操作步骤
⑴、在仪器使用前,首先连接好所需配套仪器:层析柱、恒流泵、自动部分收集器、记录仪(色谱工作站)。将各类插头与插座接妥(220V电源)。
⑵、按下检测仪ON电源开关,电源指示灯亮,说明整台仪器电源开始工作,然后观察光源指示灯,如果亮了,表示光源已开始工作,整台仪器可进入工作状态,将检测仪波长旋钮旋到所需波长刻度上,把量程旋钮拨到100%T档(仪器预热20分钟,待基线平直后可加样测试)。
⑶、接通记录仪电源开关,使电源开关拨到“通”指示灯亮。可根据记录仪说明书调换不同的纸速度,用户根据需要自行掌握,测量用10mV档。此时记录仪指针从零点开始向右移动某一刻度,调节检测仪“光量”旋钮使指针停留在记录仪大约中间位置5mV左右数字显示为50左右。。
⑷、把检测仪进样口聚乙烯塑料管接到恒流泵上,使凝胶层析柱中缓冲液流过检测仪(恒流泵流量视凝胶层析柱大小选1-3ml/min)。用“调零”调整吸光度A值为0(量程开关拨到100%T调节光量旋钮,使记录仪指针在10mV数字显示为100,即透光率为100%。把量程开关拨到“0.05 A”档,缓慢调节A调零旋钮,使记录仪指示在“O”位,检测仪显示为“O”)。
⑸、以上步骤结束,层析系统平衡后即可用洗脱液开始洗脱样品,洗脱前再调一次吸光度0点。洗脱过程结束前不可再调节“调零”旋钮。当洗脱液流过检测仪时,吸光度显示大于零的数值,吸光度数值大小随样品的浓度而变化。洗脱完毕后吸光度显示为稍大于零的数值。
⑹、数字显示吸光度和记录仪自动绘制吸光度图谱是两个互相独立的检测系统,数字显示吸光度与记录仪所绘峰值大小没有直接关系,不可互相换算。
⑺、测试完毕后,必须切断电源,并用蒸馏水清洗样品池和聚乙烯塑料管。
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