核酸蛋白检测仪常见的问题

核酸蛋白检测仪又称紫外检测仪，是 液相色谱实验中的一种紫外检测器，配上层析柱、蠕动泵、部分收集器和记录仪等就组成了一套完整的液相色谱系列装置。它是生物化学、分子生物学、基因工程、制药、化工、农业、食品以及医院等有关科研部门和生产单位在分离分析工作中不可缺少的手段。

核酸蛋白检测仪常见的问题 

 1.问:核酸蛋白检测仪读数漂移

答:所有的分光光度计测定的都是吸光值或者透光值，Biophotometer 以吸光值表示。然后通过系列计算因子换算成浓度。所以反映数据是否准确和仪器性能的关键指标是吸光值。当同一样品的所有吸光值在均数的正负0.5%左右浮动，属于正常。如果读数位于一个标准品的1%的误差范围内，说明测试准确。

2.问:读数出现负值，或者几次读数相差非常大

答:●在测试之前，需要做空白测试。空白液必须与溶解和稀释样品的液体性质-致。

●测试之前必须充分混匀，并确保无气泡产生。

●测试种注意比色杯方向- -致，光径准确。

3.问:上述所有问题我都是正确处理，依旧出现读数不稳的现象。

答:●样品浓度太低，A260nm的吸光值必须>0.1 ,读数才有意义。

●考虑样品是否刚从冰箱取出，样品在室温条件下有升温现象，会导致读数不稳定现象。

●另外，大多数客户采用水作空白，应在测试前保证水新鲜和纯净。如果水中有漂浮物，会导致读数严重漂移。

4.问:A280, A230, A260, A320各个指标的意义是什么?以及A260/230, A260/ A280比值范围在多少范围内正常.

各:●260nm波长--般是核酸的吸收峰,A260-股表示核酸的吸光度

●280nm波长一.般是蛋白质的吸收峰,A280一般表示蛋白质的吸光度

●当样品中出现悬浮物,微生物等大颗粒物质,A320的读数相对增大。纯净的样品中，

320nm的吸光值是0，一股如果A320大于0.01，应该设定A320correct功能为“0N '

●230nm的吸光值表示样品中苯酚，芳香族化合物，肽，碳水化合物等杂质的含量

●A260/A280的比值表示DNA或者RNA样品纯度，前者- -般1,8-2.0,后者- *般在2.0-2.2的范围内，表示核酸样品比较纯。如果蛋白质污染会降低这些笔直。

●A260/A230 的比值一.般大于2.0

名称正常值范围≤A320 <0. 010

A260/A280 1. 8-2. 0 (DNA)

A260/A280 2. 0-2. 2 (RNA)

>A260/A230 >2. 0

5.核酸可测定的最小值是多少?蛋白质可测定的最小值是多少?

答:仪器的吸光值范围0. 000-3. 000之间。

DNA样品测试中，检测的最 低吸光值0. 05,相当于125ngDsDNA/50u1样品，浓度2.5ug/m1RNA样品测试中，检测的最 低吸光值0. 05,对应的浓度2ug/m1, 100ngRNA/50u1 样品。.但实际操作中，要求A260nm的吸光值>0.1的吸光值才是值得信赖的。

核酸蛋白检测仪蛋白质的比色法由于所用试剂不同，所以无法确定一个准确地范围。直接法测试蛋白质，其浓度值受消光系数的影响，浓度=吸光值*消光系数*稀释倍数。蛋白质能检测的最 大范围约为4mg/ml.